高中生物植物體細(xì)胞雜交技術(shù)知識(shí)點(diǎn)
高中生物植物體細(xì)胞雜交技術(shù)知識(shí)點(diǎn)
植物體細(xì)胞雜交使遠(yuǎn)緣雜交不親和的植物有可能實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)重組，下面是學(xué)習(xí)啦小編給大家?guī)淼母咧猩镏参矬w細(xì)胞雜交技術(shù)知識(shí)點(diǎn)，希望對(duì)你有幫助。
高中生物植物體細(xì)胞雜交技術(shù)基礎(chǔ)知識(shí)點(diǎn)
1、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)：就是將不同種的植物體細(xì)胞原生質(zhì)體在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成完整植物體的技術(shù)。
2、過程：
(1)誘導(dǎo)融合的方法：物理法包括離心、振動(dòng)、電刺激等?；瘜W(xué)法一般是用聚乙二醇(PEG)作為誘導(dǎo)劑。
(2)細(xì)胞融合完成的標(biāo)志是新的細(xì)胞壁的生成。
(3)植物體細(xì)胞雜交的終點(diǎn)是培育成雜種植株，而不是形成雜種細(xì)胞就結(jié)束。
(4)雜種植株的特征：具備兩種植物的遺傳特征，原因是雜種植株中含有兩種植物的遺傳物質(zhì)。
3、意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。
高中生物植物體細(xì)胞雜交技術(shù)重要進(jìn)展
1960年，Kocking用酶法制備高等植物原生質(zhì)體首次獲得成功;
1970年，Power首次用硝酸鈉進(jìn)行為誘導(dǎo)劑進(jìn)行了較大規(guī)模的原生質(zhì)體誘導(dǎo)融合;
1971年，Takebe首次從離體煙草原生質(zhì)體培養(yǎng)中獲得再生完整植株;
1972年，Carlson首次獲得粉藍(lán)煙草和郎氏煙草的細(xì)胞雜種，這也是第一個(gè)植物細(xì)胞雜種;
1974年，Kao將聚乙二醇誘導(dǎo)融合法應(yīng)用于植物細(xì)胞融合并建立了相應(yīng)的融合技術(shù);
1978年，Melchers獲得了第一個(gè)屬間細(xì)胞雜種(番茄+馬鈴薯);
1981年，Zimmerman發(fā)明了電融合儀，并首次提出了電融合概念;
1987年，Schweiger建立了單對(duì)原生質(zhì)體電融合技術(shù)程序。
高中生物植物體細(xì)胞雜交技術(shù)
1.PEG誘導(dǎo)融合法
PEG誘導(dǎo)融合的特點(diǎn)：其優(yōu)點(diǎn)是融合成本低，勿需特殊設(shè)備;融合子產(chǎn)生的異核率較
高;融合過程不受物種限制。其缺點(diǎn)是融合過程繁瑣，PEG可能對(duì)細(xì)胞有毒害。
PEG的作用機(jī)理： Kao等認(rèn)為，由于PEG分子具有輕微的負(fù)極性，故可以與具有正極性基團(tuán)的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成H鍵，從而在在原生質(zhì)體之間形成分子橋，其華中農(nóng)業(yè)大學(xué)創(chuàng)建國(guó)家精品課程——細(xì)胞工程學(xué) 文本教案(第七章) 主講教師：柳俊博士、教授結(jié)果是使原生質(zhì)體發(fā)生粘連進(jìn)而促使原生質(zhì)體的融合;另外，PEG能增加類脂膜的流動(dòng)性，也使原生質(zhì)體的核、細(xì)胞器發(fā)生融合成為可能。
融合技術(shù)要點(diǎn)：
融合液：CaCl2·2H2O 8~10mmol
KH2PO4 0.7mmol
甘露醇或山梨醇 0.5~1.0mol
pH 5.6
誘導(dǎo)液：融合液+PEG 20～45%
稀釋液：A液(g/100ml)pH6.0 B液(g/100ml)pH10.5
葡萄糖 7.21 甘氨酸 0.375
CaCl2·2H2O 0.79 NaOH 0.169
DMSO 10ml
2.電融合法
與PEG融合比較起來，電融合有三大優(yōu)點(diǎn)：一是不存在對(duì)細(xì)胞的毒害問題;二是融合效率高;三是融合技術(shù)操作簡(jiǎn)便。
電融合儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：一是交變電場(chǎng)部分;一是高頻直流電擊部分。
電融合的基本過程：
細(xì)胞膜的接觸：當(dāng)原生質(zhì)體置于電導(dǎo)率很低的溶液中時(shí)，電場(chǎng)通電后，電流即通過原生質(zhì)體而不是通過溶液，其結(jié)果是原生質(zhì)體在電場(chǎng)作用下極化而產(chǎn)生偶極子，從而使原生質(zhì)體緊密接觸排列成串。
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