高中生物植物體細胞雜交技術(shù)知識點
高中生物植物體細胞雜交技術(shù)知識點
植物體細胞雜交使遠緣雜交不親和的植物有可能實現(xiàn)遺傳物質(zhì)重組，下面是學(xué)習(xí)啦小編給大家?guī)淼母咧猩镏参矬w細胞雜交技術(shù)知識點，希望對你有幫助。
高中生物植物體細胞雜交技術(shù)基礎(chǔ)知識點
1、植物體細胞雜交技術(shù)：就是將不同種的植物體細胞原生質(zhì)體在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成完整植物體的技術(shù)。
2、過程：
(1)誘導(dǎo)融合的方法：物理法包括離心、振動、電刺激等。化學(xué)法一般是用聚乙二醇(PEG)作為誘導(dǎo)劑。
(2)細胞融合完成的標志是新的細胞壁的生成。
(3)植物體細胞雜交的終點是培育成雜種植株，而不是形成雜種細胞就結(jié)束。
(4)雜種植株的特征：具備兩種植物的遺傳特征，原因是雜種植株中含有兩種植物的遺傳物質(zhì)。
3、意義：克服了遠緣雜交不親和的障礙。
高中生物植物體細胞雜交技術(shù)重要進展
1960年，Kocking用酶法制備高等植物原生質(zhì)體首次獲得成功;
1970年，Power首次用硝酸鈉進行為誘導(dǎo)劑進行了較大規(guī)模的原生質(zhì)體誘導(dǎo)融合;
1971年，Takebe首次從離體煙草原生質(zhì)體培養(yǎng)中獲得再生完整植株;
1972年，Carlson首次獲得粉藍煙草和郎氏煙草的細胞雜種，這也是第一個植物細胞雜種;
1974年，Kao將聚乙二醇誘導(dǎo)融合法應(yīng)用于植物細胞融合并建立了相應(yīng)的融合技術(shù);
1978年，Melchers獲得了第一個屬間細胞雜種(番茄+馬鈴薯);
1981年，Zimmerman發(fā)明了電融合儀，并首次提出了電融合概念;
1987年，Schweiger建立了單對原生質(zhì)體電融合技術(shù)程序。
高中生物植物體細胞雜交技術(shù)
1.PEG誘導(dǎo)融合法
PEG誘導(dǎo)融合的特點：其優(yōu)點是融合成本低，勿需特殊設(shè)備;融合子產(chǎn)生的異核率較
高;融合過程不受物種限制。其缺點是融合過程繁瑣，PEG可能對細胞有毒害。
PEG的作用機理： Kao等認為，由于PEG分子具有輕微的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成H鍵，從而在在原生質(zhì)體之間形成分子橋，其華中農(nóng)業(yè)大學(xué)創(chuàng)建國家精品課程——細胞工程學(xué) 文本教案(第七章) 主講教師：柳俊博士、教授結(jié)果是使原生質(zhì)體發(fā)生粘連進而促使原生質(zhì)體的融合;另外，PEG能增加類脂膜的流動性，也使原生質(zhì)體的核、細胞器發(fā)生融合成為可能。
融合技術(shù)要點：
融合液：CaCl2·2H2O 8~10mmol
KH2PO4 0.7mmol
甘露醇或山梨醇 0.5~1.0mol
pH 5.6
誘導(dǎo)液：融合液+PEG 20～45%
稀釋液：A液(g/100ml)pH6.0 B液(g/100ml)pH10.5
葡萄糖 7.21 甘氨酸 0.375
CaCl2·2H2O 0.79 NaOH 0.169
DMSO 10ml
2.電融合法
與PEG融合比較起來，電融合有三大優(yōu)點：一是不存在對細胞的毒害問題;二是融合效率高;三是融合技術(shù)操作簡便。
電融合儀的結(jié)構(gòu)特點：一是交變電場部分;一是高頻直流電擊部分。
電融合的基本過程：
細胞膜的接觸：當原生質(zhì)體置于電導(dǎo)率很低的溶液中時，電場通電后，電流即通過原生質(zhì)體而不是通過溶液，其結(jié)果是原生質(zhì)體在電場作用下極化而產(chǎn)生偶極子，從而使原生質(zhì)體緊密接觸排列成串。
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