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中國(guó)藥典黃曲霉毒素檢測(cè)過程有關(guān)問題解析
黃曲霉毒素( aflatoxin，AF) 是由黃曲霉( asperillusflavus) ，寄生曲霉( asperillus parasiticus) 等真菌產(chǎn)生的一類分子結(jié)構(gòu)相似的次級(jí)代謝產(chǎn)物，是一類毒性和致癌性很強(qiáng)的化合物，為第一類致癌物，是人類原發(fā)性肝癌的主要致病因素之一。中藥材在生長(zhǎng)和儲(chǔ)存過程中，若環(huán)境條件適宜便會(huì)滋生霉菌從而產(chǎn)生黃曲霉毒素。目前黃曲霉毒素的檢測(cè)方法主要有薄層色譜法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等，中國(guó)藥典2010年版第二增補(bǔ)本采用高效液相色譜柱后衍生法測(cè)定。本文就中國(guó)藥典黃曲霉毒素檢驗(yàn)過程中常遇到的問題以及無衍生快速檢測(cè)黃曲霉毒素的方法進(jìn)行初步探討。
1 儀器與試藥
Agilent1200 型高效液相色譜儀; Pickering Vector-PCX 柱后衍生裝置; Waters 含F(xiàn)LR 檢測(cè)器的ACQUITYUPLC H-Class 系統(tǒng); SB-5200D 超聲清洗器( 寧波新芝生物科技有限公司) ; K2042 高速離心機(jī)( 美國(guó)Kingdom) ; AE-100 電子天平( 瑞士Mettler) 。免疫親和層析柱( A、B、C 公司) ; 玻璃纖維濾紙( 北京中檢維康科技有限公司) ; 黃曲霉毒素混合對(duì)照品溶液( 美國(guó)SUPELCO 公司，批號(hào): LB74656，黃曲霉毒素G2、G1、B2、B1濃度分別為0.302、0.965、0.306、1.021 g /mL) 。甲醇、乙腈均為色譜純，所用水為純化水。地龍( 批號(hào)11008ZY04) 為汕頭美寶制藥有限公司提供; 陳皮( 批號(hào)110901) 為廣州中一藥業(yè)有限公司提供; 薏苡仁( 批號(hào)20130101B) 為廣州市香雪制藥股份有限公司提供; 柏子仁A、B、C 分別購(gòu)自廣州大參林、廣州同健和廣州采芝林藥店，批號(hào)自編。
2 方法與結(jié)果
2.1 供試品溶液的制備
取本品粉末約5 g( 過二號(hào)篩) ，精密稱定，加入黃曲霉毒素( aflatoxin，AF) 是由黃曲霉( asperillusflavus) ，寄生曲霉( asperillus parasiticus) 等真菌產(chǎn)生的一類分子結(jié)構(gòu)相似的次級(jí)代謝產(chǎn)物，是一類毒性和致癌性很強(qiáng)的化合物，為第一類致癌物，是人類原發(fā)性肝癌的主要致病因素之一。中藥材在生長(zhǎng)和儲(chǔ)存過程中，若環(huán)境條件適宜便會(huì)滋生霉菌從而產(chǎn)生黃曲霉毒素。目前黃曲霉毒素的檢測(cè)方法主要有薄層色譜法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等，中國(guó)藥典2010年版第二增補(bǔ)本采用高效液相色譜柱后衍生法測(cè)定。本文就中國(guó)藥典黃曲霉毒素檢驗(yàn)過程中常遇到的問題以及無衍生快速檢測(cè)黃曲霉毒素的方法進(jìn)行初步探討。
2.2 超高效液相色譜和熒光檢測(cè)器無衍生法快速檢測(cè)黃曲霉毒素
2.2.1 線性關(guān)系、檢測(cè)限和定量限精密吸取黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液( 黃曲霉毒素B1濃度為102.1 ng /mL) ，分別加50%甲醇制成濃度為每毫升含AFB10.204 2、0.408 4、2.042 0、6.126 0、20.420 0ng 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，搖勻，即得。分別精密吸取對(duì)照品溶液2 L，注入色譜儀中，記錄峰面積，以濃度( ng /mL) 為橫坐標(biāo)，積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明4 種黃曲霉毒素線性關(guān)系良好。按進(jìn)樣濃度分別為信噪比的3 ∶1 和10 ∶1 計(jì)算檢測(cè)限和定量限。
2.2.2 儀器精密度試驗(yàn)取黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液( B1濃度0.408 4 ng /mL) ，連續(xù)進(jìn)樣5 次，結(jié)果黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的RSD 分別為0.6%、1.2%、1.0%和0.2%，表明儀器精密度良好。
2.2.3 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的桃仁( AFB20.26 g /kg，AFB11.69 g /kg) 樣品5.0 g，精密稱定，按低、中、高濃度分別加入2、5、10 mL 的黃曲霉毒混合對(duì)照品溶液( B1濃度2.042 ng /mL) ，按2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。
2.2.4 樣品測(cè)定取所收集的柏子仁樣品，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算供試品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量，結(jié)果與采用柱后碘衍生法測(cè)定結(jié)果相差不大。
3 討論
采用0.01%碘溶液、衍生化泵流速0.4 mL /min與現(xiàn)行中國(guó)藥典0.05%碘溶液、衍生化泵流速0.3mL /min 的衍生效果相差不大，但降低碘衍生溶液濃度，可以在實(shí)際檢驗(yàn)過程中有效減少管路堵塞同時(shí)明顯延長(zhǎng)熒光檢驗(yàn)器使用壽命。免疫親和柱對(duì)黃曲霉毒素能特異性吸附，可以極大的減少其他雜質(zhì)的污染，但中藥材化學(xué)成分復(fù)雜，不同品牌的免疫親和柱的回收率會(huì)有差異，因此在實(shí)際測(cè)定過程，需要根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的免疫親和小柱。AFB1和AFB2在紫外光下可產(chǎn)生藍(lán)綠色熒光，AFG1和AFG2在紫外光下可產(chǎn)生黃綠色熒光，反相洗脫液會(huì)淬滅黃曲霉毒素B1和G1的熒光效應(yīng)，因此通常檢測(cè)AFB1和AFG1的需要進(jìn)行衍生。通常AFB1和AFG1的衍生方法主要有柱前三氟乙酸衍生法，柱后碘液法、電化學(xué)衍生溴法或光化學(xué)UV 衍生法，無論柱前衍生還是柱后碘( 溴) 衍生，均需配制衍生化試劑或增加額外的裝置，同時(shí)還會(huì)造成系統(tǒng)的污染，而液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法相對(duì)來說檢驗(yàn)成本較高，適合用于陽性樣品的確證。本文嘗試用沃特世ACQUITY UPLC H-Class 系統(tǒng)，使用大體積的FLR 流通池，延長(zhǎng)黃曲霉毒素在流通池的停留時(shí)間，從而使黃曲霉毒素檢測(cè)信號(hào)增強(qiáng)，達(dá)到無衍生即可測(cè)定的目的，同時(shí)消除柱后衍生系統(tǒng)和降低帶來的譜帶展寬，形成尖峰，實(shí)現(xiàn)高信噪比，保證了定量更加準(zhǔn)確; 另外，采用UPLC 代替HPLC，縮短了分析時(shí)間，減少了溶劑的消耗，使分析方法更加環(huán)保。致謝: 感謝沃特世科技( 上海) 有限公司曾瑋在超高效液相色譜-熒光檢測(cè)器無衍生快速檢測(cè)黃曲霉毒素方法的建立上提供的幫助。
中藥艾的抗炎免疫研究進(jìn)展及臨床實(shí)踐
艾，又名冰臺(tái)(《爾雅》)、艾蒿(《爾雅》郭璞注)、醫(yī)草(《名醫(yī)別錄》)、炙草(《埤雅》)、蘄艾(《蘄艾傳》)、黃草(《本草綱目》)、家艾(《醫(yī)林纂要》)、甜艾(《本草求原》)、艾蓬、香艾、阿及艾(《中藥大辭典》)，菊科蒿屬植物(Artemisia argyiLevi.et Vant.)及近鄰種的復(fù)合稱謂，我國(guó)各地區(qū)及亞洲周邊國(guó)家均有生長(zhǎng)。藥用其葉，故藥材名為艾葉，性溫、味苦辛，歸肝脾腎經(jīng)，為我國(guó)傳統(tǒng)中草藥。艾藥用歷史悠久，是中醫(yī)臨床常用藥物之一。傳統(tǒng)藥性理論認(rèn)為，艾葉有理氣血、逐寒濕、溫經(jīng)血、安胎、殺蟲止癢等作用，可用于治療虛寒出血，尤宜于崩漏。其用法有水煎服(煎劑)、煎水洗(洗劑)、灸劑、煙熏(煙熏劑)和制酒服(酒劑)。艾的藥用功能來源于其中所含化學(xué)物質(zhì)，經(jīng)不同方式處理(水提、醇提、炙燒等)所獲得的化學(xué)成分有所不同，主要成分有黃酮類、桉葉烷類、三萜類、鞣質(zhì)、多糖、揮發(fā)油和微量元素等。現(xiàn)代研究通過對(duì)艾葉揮發(fā)油、艾煙、艾的水提物、艾的醇提物等相關(guān)成分進(jìn)行研究，證實(shí)艾化學(xué)成分復(fù)雜，作用廣泛，具有抗菌、抗病毒、平喘、鎮(zhèn)咳、祛痰、利尿、抗過敏、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗瘧疾、抗腫瘤、止血、抗凝血、激活補(bǔ)體等功效，對(duì)呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等均具有較強(qiáng)的生物學(xué)作用。近年來，針對(duì)艾在抗炎方面的研究主要集中其揮發(fā)油、艾灸的抗炎藥效機(jī)制和臨床應(yīng)用，以艾為主藥或輔藥治療炎性疾病的中藥復(fù)方研究，并取得了一定的成果。本文對(duì)國(guó)內(nèi)外關(guān)于中藥艾抗炎免疫作用的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為臨床用藥提供參考。
1 艾葉油的抗炎免疫作用
現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，艾葉的主要成分是揮發(fā)油，所含化學(xué)成分主要有：-蒎烯、-蒎烯、-松油烯、-松油烯、桉葉素、異澤蘭黃素、蒿酮、蒿醇、斯巴醇、2-環(huán)己烯-1-醇、樟腦、龍腦、4-松油醇、反式-石竹烯、丁子香酚、長(zhǎng)葉薄荷酮等。其中桉葉素、樟腦、龍腦、長(zhǎng)葉薄荷酮、斯巴醇、異澤蘭黃素等具有較強(qiáng)的抗炎作用。因此，在藥理實(shí)驗(yàn)研究或臨床上艾葉油可用于治療多種炎性疾病。
1.1 艾葉油的抗炎作用
在炎癥發(fā)生與發(fā)展過程中，早、中、晚期的特征各有不同，因此在進(jìn)行藥理研究時(shí)可應(yīng)選擇相應(yīng)的早期滲出和腫脹模型、中期白細(xì)胞游走模型、晚期肉芽腫增生模型。蔣涵等研究發(fā)現(xiàn)蘄艾揮發(fā)油治療二甲苯致小鼠耳廓腫具有明顯的抗炎作用。李波等通過早期乙酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增大、二甲苯致小鼠耳腫脹、角叉菜膠致小鼠足腫脹炎癥模型，中期羧甲基纖維素(CMC)致白細(xì)胞游走炎癥模型，晚期小鼠棉球肉芽腫炎癥模型，研究發(fā)現(xiàn)艾葉油對(duì)炎癥發(fā)生早、中、晚期均有抑制作用。其中，對(duì)炎癥早期的抗炎效果尤為明顯，主要表現(xiàn)在增加毛細(xì)血管通透性，減少組織液的滲出和降低腫脹程度;艾葉油的炎癥早期抗炎機(jī)理為通過抑制PGE2的生成和釋放、減少M(fèi)DA的生成和抑制iNOS的活力實(shí)現(xiàn)。萬毅等通過構(gòu)建金黃葡萄球菌感染和綠膿桿菌、大腸桿菌感染構(gòu)建豚鼠陰證瘡瘍和陽證瘡瘍模型研究艾葉揮發(fā)油的抗陽證瘡瘍和陰證瘡瘍作用;結(jié)果表明，艾葉揮發(fā)油可減少病變部位的組織脫落壞死、促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)、減少炎細(xì)胞浸潤(rùn)，對(duì)陰證瘡瘍和陽證瘡瘍具有良好的治療作用。
1.2 艾葉油的抗過敏和免疫作用
蔣涵等研究發(fā)現(xiàn)，蘄艾揮發(fā)油可減輕2，4-二硝基氯苯誘導(dǎo)的遲發(fā)性過敏反應(yīng)，具有良好的抗過敏作用。相關(guān)研究表明，艾葉油中成分2-萜品稀醇、葛縷醇可抑制大鼠被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)和5-羥色胺引起的皮膚血管滲透性增強(qiáng)。楊紅菊研究發(fā)現(xiàn)，艾葉揮發(fā)油對(duì)大鼠被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)(IgE介導(dǎo)的速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)模型)及參與并加重速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)疾病的Ⅲ型、Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)均有明顯的抑制作用。體內(nèi)灌胃給藥可抑制小鼠單核吞噬功能、小鼠免疫器官脾臟和胸腺的生長(zhǎng)及小鼠體內(nèi)抗體溶血素的生成。體外實(shí)驗(yàn)表明，艾葉油對(duì)Com-pound 48/80、鈣離子載體金霉素、抗原馬血清誘發(fā)的大鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒均有一定程度的抑制作用，還能抑制大鼠腹腔肥大細(xì)胞膜上Ca2+ -Mg2+-ATPase和Mg2+-ATPase的活力，抑制Ca2+ 的轉(zhuǎn)運(yùn);結(jié)果提示，艾葉油不僅是過敏介質(zhì)的阻釋劑，也是過敏介質(zhì)的拮抗劑，在速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的主要環(huán)節(jié)作用明顯。
2 艾灸的抗炎免疫作用
孫思邈《千金方》記載，艾灸治療疔腫、火瘡、發(fā)背等感染性疾病。艾灸法種類繁多，常用的灸法主要有艾炷灸、艾條灸、溫針灸、溫灸器灸。其治療根本原理為通經(jīng)脈、調(diào)氣血、以通為用，即其溫?zé)嶙饔眉鞍乃幮宰饔镁C合效應(yīng)。臨床實(shí)踐證明，艾灸在改善情緒、增強(qiáng)免疫、促進(jìn)代謝、延緩衰老及治療神經(jīng)衰弱、焦慮、失眠、抑郁、喘咳、感冒、炎癥、疼痛、皮膚病等方面均具有明顯的效果。姜?jiǎng)欧宓日J(rèn)為，艾灸抗炎作用是其治療疾病的主要效應(yīng)途徑，其溫通效應(yīng)對(duì)炎性反應(yīng)的功能障礙、氣血阻滯狀態(tài)具有針對(duì)性療效。艾灸療法可調(diào)節(jié)人體免疫功能，對(duì)免疫分子、免疫器官、免疫細(xì)胞、紅細(xì)胞免疫等具有調(diào)節(jié)作用。艾灸療法的抗炎免疫作用為其防治各類相關(guān)疾病提供了理論基礎(chǔ)。
2.1 艾灸的抗炎作用
艾灸對(duì)大鼠右后足拓與關(guān)節(jié)腫脹的急性炎癥、大鼠棉球性肉芽腫的亞急性炎癥和大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)慢性炎癥均有明顯的抗炎、消腫作用，其中對(duì)中期、后期炎癥的抗炎效果更為明顯，可有效預(yù)防或減輕AA 大鼠遲發(fā)性及全身多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，明顯抑制炎性遞質(zhì)TNF、IL-1、5-HT、組胺等的釋放，改善由炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的自由基代謝紊亂情況，進(jìn)而減輕由脂質(zhì)過氧化導(dǎo)致的細(xì)胞毒性和功能受損狀態(tài)。艾灸治療可明顯減輕類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)模型大鼠的關(guān)節(jié)腫脹程度，具有控制炎癥的作用。進(jìn)一步研究結(jié)果提示艾灸可能通過抑制中樞海馬MELIB受體，下調(diào)血清褪黑激素水平，促進(jìn)抗炎因子IL-4分泌，調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞因子平衡，抑制NF-B信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，發(fā)揮抗炎作用，阻止炎癥發(fā)展。艾灸還可明顯改善實(shí)驗(yàn)性RA 家兔全身狀況、膝關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)滑膜炎癥病理變化，具有明確的抗炎消腫、抑制滑膜炎癥作用。
劉密等研究艾灸治療應(yīng)激性胃黏膜損傷大鼠效果發(fā)現(xiàn)，艾灸足三里、中脘等穴位可使大鼠胃黏膜損傷指數(shù)明顯下降、血清促炎因子IL-1、TNF-含量降低，抗炎因子IL-10含量升高，減輕炎癥反應(yīng)。吳煥淦等研究發(fā)現(xiàn)，艾灸療法可有效降低潰瘍性結(jié)腸炎(UC)大鼠結(jié)腸IL-1及IGFI的表達(dá)，消除UC大鼠腸道炎癥，且可起到防治腸纖維化、腸道癌變的作用。趙琛等研究發(fā)現(xiàn)，艾灸能改善潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸病理情況，通過下調(diào)結(jié)腸中KGF-l、KGF-2和IL-6蛋白的表達(dá)，起到治愈的效果。
王蕓等研究發(fā)現(xiàn)艾灸可有效改善盆腔炎后遺癥大鼠局部SIgA分泌不足、降低TNF-和IL-6的分泌，抑制局部炎癥反應(yīng)，改善盆腔的局部免疫功能。相關(guān)研究顯示，艾灸可起到延遲動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的作用，有效降低AS兔血清中促炎因子SAA、IL-6、TNF-的含量，提高抗炎因子IL-10的含量，促進(jìn)AS兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞PPAR的表達(dá)，抑制AS兔主動(dòng)脈TLR4的表達(dá)。提示艾灸可通過調(diào)節(jié)炎癥因子，激活PPAR的蛋白表達(dá)，抑制TLR4活性，起到抗炎、抑制血管平滑肌增殖遷移，最終保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，延遲動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的作用。艾灸可降低腰神經(jīng)根受壓大鼠模型局部炎性因子含量;降低創(chuàng)傷性膝關(guān)節(jié)炎模型兔血清中的炎性因子含量，減輕關(guān)節(jié)軟骨損傷程度;預(yù)先艾灸能夠顯著降低腦缺血再灌注大鼠血清炎性細(xì)胞因子的含量，預(yù)防大鼠腦缺血再灌注過程中的炎性反應(yīng)，保護(hù)神經(jīng)元。
2.2 艾灸的免疫調(diào)節(jié)作用
周峰等在豚鼠結(jié)核桿菌感染后以艾炷灸治療，發(fā)現(xiàn)豚鼠腹腔滲出液中中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)菌能力明顯增高，成熟巨噬細(xì)胞增多，吞噬作用增強(qiáng)。唐照亮等采用氫化可的松致小鼠免疫功能低下模型研究艾灸的免疫調(diào)節(jié)作用，發(fā)現(xiàn)艾灸可起到保護(hù)胸腺、脾臟等免疫器官，增強(qiáng)及改善機(jī)體的免疫功能，糾正自由基代謝的紊亂，調(diào)整神經(jīng)遞質(zhì)NE、5-HT、NO的失衡，促進(jìn)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，外周交感神經(jīng)參與艾灸對(duì)免疫的調(diào)節(jié)，部分作用通過腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)而發(fā)揮，通過神經(jīng)-體液調(diào)節(jié)途徑，多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)調(diào)節(jié)臟腑經(jīng)絡(luò)，平衡陰陽，穩(wěn)定機(jī)體內(nèi)環(huán)境，從而起到免疫調(diào)節(jié)作用。羅玲通過D-半乳糖注射形成的亞急性衰老免疫低下模型和佐劑性關(guān)節(jié)炎免疫紊亂模型研究艾灸免疫調(diào)節(jié)作用的局部作用機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)艾灸可糾正衰老低下的免疫狀態(tài)，可能與艾灸施術(shù)部位的MHC-Ⅱ、IL-2、CD80及波形蛋白的皮膚免疫激活有關(guān)。艾灸可調(diào)整佐劑性關(guān)節(jié)炎模型紊亂的免疫功能，可能與下丘腦和穴位局部的瘦素、瘦素受體的表達(dá)增強(qiáng)有關(guān)。艾灸對(duì)免疫調(diào)節(jié)的局部作用可能與神經(jīng)免疫網(wǎng)絡(luò)有關(guān)，形成皮膚-神經(jīng)免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)機(jī)制。
2.3 艾灸抗炎免疫臨床研究
從適應(yīng)病譜分析發(fā)現(xiàn)，艾灸可有效治療多種炎性疾病，包括橋本甲狀腺炎、慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、慢性非細(xì)菌性前列腺炎、慢性盆腔炎等。國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)灸法作用的基本原理與應(yīng)用規(guī)律研究項(xiàng)目研究表明，艾灸對(duì)炎癥性腸病、淺表性胃炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰椎間盤突出癥、高脂血癥-動(dòng)脈硬化具有良好的臨床療效。
艾瑞可研究發(fā)現(xiàn)，臨床上采用艾灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎可改善類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的各項(xiàng)指標(biāo)，提高患者的自身免疫功，增強(qiáng)體質(zhì)，患者癥狀呈漸進(jìn)性的快速改善。岳寶安等將354例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者隨機(jī)分為治療組與對(duì)照組各177例，治療組患者采用隔藥艾灸法治療，對(duì)照組患者給予中藥辨證治療;2個(gè)療程后，結(jié)果顯示：治療組患者痊愈96例，顯效58例，好轉(zhuǎn)14例，總有效率97.67%;對(duì)照組患者痊愈56例，顯效46例，好轉(zhuǎn)38例，總有效率81.40%。提示隔藥艾灸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎療效確切。
胡國(guó)勝等對(duì)36例橋本氏甲狀腺炎患者采用艾灸治療，結(jié)果顯示，艾灸療法可明顯下降橋本氏甲狀腺炎患者外周血淋巴細(xì)胞OKT4+/OKT8+ 細(xì)胞比值和淋巴細(xì)胞分泌甲狀腺抗體TGA、MCA 的水平;研究認(rèn)為，艾灸可能是通過調(diào)整T淋巴細(xì)胞亞群的比例關(guān)系來抑制B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗甲狀腺抗體的水平，從而達(dá)到治療橋本氏甲狀腺炎的效果。施征等[33]采用艾灸治療109例潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患者，隨機(jī)分為隔藥灸組(n=61)與隔麩灸組(n=48)，6個(gè)療程后，結(jié)果顯示隔藥灸組患者痊愈32例，好轉(zhuǎn)24例，總有效率91.8%;隔麩灸組患者痊愈15例，好轉(zhuǎn)23例，總有效率79.17%，隔藥灸治療效果明顯優(yōu)于隔麩灸治療。治療后，隔藥灸組患者結(jié)腸黏膜組織的IL-8、ICAM-1表達(dá)明顯降低，艾灸對(duì)UC的作用機(jī)理可能是通過抑制IL-8、ICAM-1的表達(dá)，從而達(dá)到消除炎癥的目的。艾灸還可抑制炎性細(xì)胞因子的釋放，降低細(xì)胞的炎性應(yīng)激，有效治療慢性疲勞綜合征;顯著降低缺血性腦血管病患者的血清炎性細(xì)胞因子，有效降低復(fù)發(fā)率。
3 艾葉復(fù)方的臨床應(yīng)用
曾金香等將112例急性乳腺炎患者隨機(jī)分為治療組與觀察組各56例，治療組患者采用艾葉、生姜制劑熱敷雙乳，對(duì)照組患者給予溫開水熱敷，均輔以按摩。1個(gè)療程后，治療組患者痊愈56例，總有效率為100.0%;對(duì)照組患者痊愈13例，好轉(zhuǎn)13例，無效4例，總有效率達(dá)43.6%。蔡志鋼等采用前炎靈栓劑(野菊花、野艾葉、蓮須等)直腸給藥治療慢性前列腺炎患者100例，治療1～2個(gè)療程后，患者痊愈61例，有效36例，無效3例，總有效率為97.0%。采用艾葉制成注射液同時(shí)給予保肝藥物治療慢性肝炎患者123例，其中遷延性肝炎患者39例，治愈28例，顯效6例，好轉(zhuǎn)5例;慢性肝炎患者46例，治愈21例，顯效19例，好轉(zhuǎn)6例;肝硬化患者15例，顯效3例，好轉(zhuǎn)4例，無效8例;總有效率為92.4%。采用艾絨卷熏燙感染部位治療鉤蚴皮炎患者106例，24h內(nèi)癢感消失者77例，仍有癢感者28例，奇癢者1例;對(duì)照組患者50例未加治療，癢感持續(xù)時(shí)間短則3～4天，長(zhǎng)則5～6天，少數(shù)皮炎進(jìn)展為紅腫，水泡或因抓破而潰爛;治療組患者呼吸道癥狀(氣急、咳嗽)發(fā)病率為1.88%，低于對(duì)照組的14.00%(P0.05)。采用艾葉復(fù)方(白及、桂枝、艾葉等)治療慢性非特異性潰瘍、結(jié)腸炎患者36例，3周全部治愈。
4 其他應(yīng)用
迄今，陸續(xù)有艾葉其他活性成分被發(fā)現(xiàn)有顯著的抗炎免疫作用。如艾煙冷凝物可提高大鼠肺泡巨噬細(xì)胞NR8383的吞噬功能;艾葉多糖可促進(jìn)小鼠T、B細(xì)胞的增殖，對(duì)小鼠細(xì)胞免疫和體液免疫均有調(diào)節(jié)作用;艾蒿的水溶性多糖N-乙?；?D-葡糖胺(FAAP-02)可顯著抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)其存活時(shí)間，提高其胸腺和脾臟指數(shù)，血清IL-2、IL-6、IL-12、TNF-水平和CD4+、CD8+ 脾T淋巴細(xì)胞數(shù)量，并能通過改善5-氟尿嘧啶(5-FU)誘導(dǎo)的免疫機(jī)能障礙達(dá)到協(xié)同抗腫瘤效果，說明其抗腫瘤活性可能是通過改善宿主的免疫應(yīng)答實(shí)現(xiàn)。艾蒿的倍半萜二聚體化合物DSF-5能抑制小膠質(zhì)細(xì)胞過度激活后分泌的多種炎癥介質(zhì)PGE2、TNF-、iNOS、COX-2、IL-1、GM-CSF、MIP-1，并能顯著上調(diào)抗炎因子IL-10的表達(dá)。通過抑制AKT/IB/NF-B、JNK/P38MAPKs和JAK2/STAT 3信號(hào)通路而起到抗炎作用。艾葉發(fā)酵物和水提物具有抗白色念珠菌的作用，可降低小鼠陰道白色念珠數(shù)，減輕陰道組織病理?yè)p傷，減輕炎癥，對(duì)小鼠白色念珠菌性陰道炎可起到治愈的作用。
5 結(jié)語
艾葉應(yīng)用歷史悠久，富含多種活性物質(zhì)，藥源豐富，毒性低，價(jià)廉，藥效廣。但其相關(guān)的單體成分的生物活性、藥理毒理、藥效機(jī)制等方面的研究并不系統(tǒng)全面。關(guān)于艾葉的抗炎免疫作用方面的基本理論、臨床療效、作用機(jī)制及臨床安全性評(píng)價(jià)亦有待進(jìn)一步深入研究，以促進(jìn)艾葉在治療臨床各種炎性疾病、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的推廣和應(yīng)用。
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