與醫(yī)學相關的論文的范文錦集
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談百合固金湯、四逆湯含藥血清對TLR2和TLR4比值的影響
本項研究所用四逆湯為《傷寒論》之經(jīng)方，百合固金湯典出明代《慎齋遺書》。此兩方之立方均據(jù)張仲景之六經(jīng)辯證。且推其早年之回陽救逆和滋陰養(yǎng)肺功效均與感染性疾病有不解之緣。此兩方之藥理又恰為中醫(yī)養(yǎng)陰回陽治則之代表。故選此兩方為對照，觀察機體感染發(fā)生過程中，兩者對固有免疫調節(jié)之異同，極有可能揭示養(yǎng)陰回陽兩種治則對免疫細胞之實際作用。在基于經(jīng)驗的中醫(yī)臨床治則和基于實證的現(xiàn)代免疫藥理之間牽起一線姻緣。
Toll樣受體(Toll-like receptor，TLR)是表達于巨噬細胞表面的一類模式識別受體(pattern recognition receptor， PRR)，在固有免疫應答中發(fā)揮了重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)TLR2與TLR4在炎癥信號轉導途徑中并非起協(xié)同作用，研究發(fā)現(xiàn)TLR2的表達能抑制TLR4信號的過度激活。故推測TLR2和TLR4可能是養(yǎng)陰回陽兩種治則對免疫細胞，尤其對固有免疫細胞的功能產(chǎn)生調節(jié)的重要物質基礎和藥理作用靶標。TLR2和TLR4是識別結核分枝桿菌的主要模式識別受體，此文選取臨床治療結核感染的百合固金湯和對感染性休克起治療作用的四逆湯為例，觀察兩方對RAW264.7細胞表面TLR2和TLR4比值是否存在影響，作為深入探討?zhàn)B陰回陽治則在抗感染作用研究中的引玉之磚。
1 材料與方法
1.1 動物、細胞及細菌
體重(2.00.2)kg，健康雄性新西蘭大白兔10只，由上海中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供。小鼠巨噬細胞RAW264.7，購自中國科學院上海細胞生物學研究所。結核分枝桿菌株H37Ra，引自上海復旦大學遺傳學研究所。
1.2 主要試劑
百合固金湯和四逆湯個飲片，均購自上海養(yǎng)和堂中藥飲片有限公司;慶大霉素注射液，購自上海中醫(yī)藥大學附屬曙光醫(yī)院;DMEM高糖培養(yǎng)液、胎牛血清、胰酶，均購自Gibco公司;7H9、7H10培養(yǎng)基，均購自BD Difco公司;TRIzol試劑， 購自Invitrogen公司;逆轉錄試劑盒及2PCR Mixture， 購自TAKARA 公司;PCR 引物，由上海生工生物工程有限公司合成;FITC標記anti-mouse CD282(TLR2)熒光抗體與PE標記anti-mouse CD284(TLR4)熒光抗體及其同型對照，均購自于Biolegend公司;PCR-Fluorescent Probing試劑盒，購自凱杰生物工程(深圳)有限公司。
1.3 細菌培養(yǎng)
用含10%ADC的7H9培養(yǎng)液，在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每周觀察1次，一般培養(yǎng)1～2周可見瓶底有細菌顆粒生長，(10～15)d達對數(shù)生長期。取對數(shù)生長期細菌用不含血清的DMEM 培養(yǎng)液重懸，調整細胞密度為1107 個/ml。
1.4 細胞培養(yǎng)
小鼠巨噬細胞RAW264.7按常規(guī)方法用含有10%胎牛血清的DMEM 高糖培養(yǎng)液，在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，調整細胞密度為1106 個/ml，以每孔2ml鋪于6孔板中，24h后用于后續(xù)實驗。
1.5 含藥血清的制備及細胞干預
各方按臨床用藥量乘以動物的體表面積系數(shù)求得相應給藥量，經(jīng)常規(guī)方法煎煮，濃縮至10倍劑量置4℃冰箱備用。10只新西蘭大白兔隨機分為空白對照組(control，4只)、百合固金湯組(BGD，3只)和四逆湯組(SND，3只)。各用藥組按10ml/kg灌服相應藥液，對照組灌服等量生理鹽水。每日1次，連續(xù)4d。于最后一次灌胃1h后心臟采血(最后一次給藥前禁食不禁水12h)分離血清，同組動物血清混勻，56℃滅活30min后，經(jīng)0.22m 微孔濾膜過濾除菌，分裝置-80℃冰箱備用。將RAW264.7細胞密度調整為1106 個/ml，每組設3復孔，2ml/孔鋪于6孔板常規(guī)培養(yǎng)24h后，各用藥組加入含10%相應含藥血清的DMEM 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，對照組加入含10%空白兔血清培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，24h后檢測各組TLR2、TLR4的mRNA 及蛋白表達量。
1.6 感染模型建立及藥物干預
模型組用含10%空白兔血清的培養(yǎng)液重懸沉淀細胞，分別作用24h和48h后進行相關指標的檢測。各含藥血清組及對照組按照細胞∶細菌為1∶10的比例加入用10%相應含藥血清培養(yǎng)液重懸的細菌，密度為1107 個/ml的Mtb H37Ra，2ml/孔。
1.7 指標測定
TLR2與TLR4的mRNA表達以RT-QPCR 的方法檢測， 以GAPDH 作為內(nèi)參，結果用2-△△Ct表示。TLR2與TLR4蛋白表達水平的檢測，以FACS檢測細胞表面TLR2與TLR4的表達百分比。細胞吞噬、殺菌能力測定，以QPCR檢測巨噬細胞內(nèi)結核分枝桿菌DNA含量： 按照凱杰生物工程(深圳)有限公司的PCRFluorescent Probing試劑盒說明做標準曲線后計算各樣本中的結核分枝桿菌拷貝數(shù)。
1.8 統(tǒng)計學分析
所有數(shù)據(jù)以xs表示，應用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計學處理，多組間比較采用單因素方差分析，二組間比較采用t檢驗，P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
2 結果
2.1 百合固金湯和四逆湯
含藥血清對TLR2與TLR4 mRNA表達的影響及其比值的改變 表1結果顯示，與對照組相比，百合組RAW264.7細胞TLR2mRNA的表達沒有明顯差異(P0.05)，但TLR4mRNA 水平較之上升明顯(P 0.05)，TLR2/TLR4 下調明顯(P 四逆組RAW264.7細胞TLR2及TLR4mRNA的表達都明顯上升(P0.05)，但TLR2/TLR4較之無明顯差異。兩用藥組之間比較TLR2、TLR4及TLR2/TLR4的差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。
2.2 百合固金湯和四逆湯
含藥血清對TLR2與TLR4蛋白表達的影響及其比值的改變 圖1、表2結果表明，與對照組相比，兩用藥組RAW264.7細胞表面TLR2和TLR4表達百分率均有上升，TLR2增加尤為明顯(P0.05)，兩用藥組之間相比可見百合組TLR2 百分數(shù)較四逆組低(P 0.05)，但TLR4百分數(shù)較四逆組高(P0.05)。表中結果顯示，與對照組相比，百合組TLR2/TLR4比值比空白組略低，但不明顯(P0.05)，而四逆組TLR2/TLR4比值明顯高于空白組(P0.05)，兩用藥組相比，四逆組TLR2/TLR4比值較百合組增長更明顯(P0.05)。
2.3 百合固金湯和四逆湯含
藥血清對巨噬細胞吞噬殺菌能力的影響 QPCR法檢測巨噬細胞內(nèi)結核桿菌DNA的表達水平，以細菌數(shù)量取lg10作統(tǒng)計處理，圖2顯示Mtb H37Ra與RAW264.7細胞作用24h和48hQPCR法檢測到的細菌含量差異，24h結果顯示三組之間無明顯差異，而48h的結果顯示百合組的細菌含量較其他兩組明顯減少(P0.05)。各用藥組24h和48h的前后比較發(fā)現(xiàn)百合組較之對照組和四逆組其殺菌能力明顯提高(P0.05)，提示百合固金湯抗癆作用可能與調節(jié)TLR2/TLR4比值相關。
3 討論
TLR是一種重要的PRR，能夠識別多種病原相關分子模式(PAMP)，TLR的研究已涉及到腫瘤，自身免疫性疾病，自身代謝性疾病及各種感染性疾病等多個領域。在目前發(fā)現(xiàn)的10種人類TLR中，TLR2與TLR4是其中研究得較為清楚的兩種。TLR2可廣泛識別多種病原相關分子模式，包括革蘭陽性菌的磷壁酸和肽聚糖、分枝桿菌胞壁組分、細菌脂蛋白、鉤端螺旋體的LPS、酵母菌細胞壁等等，TLR4是第一個在哺乳動物發(fā)現(xiàn)的TLR，可以識別LPS、磷壁酸、熱休克蛋白、呼吸道合胞病毒F蛋白等配體。以往許多研究顯示TLR2、TLR4能夠啟動機體的固有免疫應答，對病原體發(fā)揮殺滅清除作用。通常認為TLR2、TLR4都可經(jīng)MyD88(myeloid differentiation factor 88)途徑調控炎癥基因的轉錄。但也不排除兩者都存在有非MyD88依賴的轉導途徑。盡管多數(shù)文獻認為TLR2與TLR4在炎癥信號轉導途徑中起協(xié)同作用，但Finamore等對乳酸桿菌的研究時發(fā)現(xiàn)，TLR2在抑制TLR4信號過度激活的過程中有重要作用，可能成為抗炎治療的新的靶點。而早在2012年，國內(nèi)就有過類似的報道，北京解放軍第306醫(yī)院消化內(nèi)科曹艷菊用雙歧三聯(lián)活菌治療急性結腸炎模型大鼠，隨后檢測TLR2、TLR4及NF-B的表達，結果發(fā)現(xiàn)益生菌組TLR2表達較模型組明顯增加，而TLR4表達明顯下降，NF-B活性較模型組也明顯降低，提示益生菌可能通過進一步增加TLR2 的表達，并抑制TLR4的表達，進而調控NF-B的活性，以緩解腸道炎癥。這些發(fā)現(xiàn)與本實驗所提供的研究結果似有類似之處，提示某些藥物或微生物確實可以誘導形成TLR2、TLR4表達的拮抗局面，并由此而影響感染與炎癥的發(fā)展與轉歸。
在本項研究的結果中，似乎可提示以四逆湯(附子、干姜、甘草)為代表的回陽救逆治則與以百合固金湯(百合、玄參、白芍、生地、熟地等)為代表的養(yǎng)陰治則在對感染過程中識別病原體的PRR表達類型可產(chǎn)生不同的調節(jié)格局，如本項研究所顯示?；蛟S百合固金湯對TLR4表達增高的調節(jié)作用與其治療結核病的臨床功效有著內(nèi)在聯(lián)系(啟動炎癥通路，清除細胞內(nèi)的結核分枝桿菌);而四逆湯之增高TLR2表達的作用也是和其治療感染性休克的臨床作用不可分離(有可能通過TLR2/TLR4的拮抗作用，降低了TLR4對LPS的反應敏感性)。盡管這樣的推論與猜測還需要更多深入的研究去加以驗證，但目前的發(fā)現(xiàn)無疑是一個新的開端。這為中醫(yī)陰陽理論在感染性疾病的實踐應用中所取得的卓越療效提供了可能的科學解釋。
β―七葉皂苷鈉的藥理毒理作用新研究及不良反應對比分析
摘 要：由于療效確切，臨床上廣泛用于腦出血或腦梗死引起的腦水腫、血栓性靜脈炎、靜脈回流障礙性疾病、創(chuàng)傷和手術后引起的腫脹等疾病。
關鍵詞：七葉皂苷鈉;藥理作用;不良反應;對比分析
β-七葉皂苷鈉是臨床上較常見的一種藥物，遮光、密封保存，屬注射劑，為非醫(yī)保類處方藥。主要成分為中藥七葉樹科植物天師栗(Aesculus Wilsonii Rehd.)成熟果實中提取的三萜皂苷的鈉鹽，白色粉末或結晶性粉末，味苦澀而辣，具引濕性，
注射劑為本品為白色凍干疏松塊狀物，其主要作用機制是抗炎、抗?jié)B出、抗氧自由基、抗水腫、增加靜脈張力，改善血液循環(huán)以及神經(jīng)保護等作用，因該藥口服在胃腸道不吸收，肌肉注射易引起組織壞死，故僅供靜脈注射使用。β-七葉皂苷鈉因具有明顯抗?jié)B出，由于療效確切，臨床上廣泛用于腦出血或腦梗死引起的腦水腫、血栓性靜脈炎、靜脈回流障礙性疾病、創(chuàng)傷和手術后引起的腫脹等疾病。
一、藥理
本品能促使機體提高ACTH和可的松血漿濃度，能促進血管壁增加PGF2α的分泌，能清除機體內(nèi)自由基，從而起到抗炎、抗?jié)B出，提高靜脈張力，加快靜脈血流，促進淋巴回流，改善血液循環(huán)和微循環(huán)，并有保護血管壁的作用。
二、毒理
在日劑量每公斤體重0.5mg以下未發(fā)現(xiàn)溶血現(xiàn)象。急性毒性研究：靜脈注射LD50劑量，動物發(fā)生急性中毒，主要表現(xiàn)為實質性器官(心、肝、腎)的溶血性缺氧壞死;對黏膜和肌肉組織有較強的刺激作用。慢性毒性研究：每天靜脈給予家兔相當于LD50的1/5劑量，連續(xù)30天，未發(fā)生動物死亡，其實質器官也未發(fā)生任何病理性變化。致畸試驗：無致畸作用，觀測到孕婦頭3個月羊水中藥物含量較高，故建議孕婦禁用。
七葉皂苷鈉的半衰期僅為1.5小時，但因能促進機體增加ACTH、前列腺素F2α的分泌，使生物效應維持時間較長，靜脈注射16小時后，仍有抗?jié)B出、消腫作用。靜脈給藥，幾乎沒有生物轉化，注射1小時后，有1/3劑量排泄，其中2/3通過膽汁排入腸道，1/3進入尿中。七葉皂苷與血漿蛋白結合率在90%以上。
1.可見注射部位局部疼痛、腫脹，經(jīng)熱敷可使癥狀消失。
2.偶有過敏反應，可按藥物過敏處理原則治療。
但對近幾年來應用七葉皂苷鈉的治療作用及不良反應進行整理歸納和分析， 將七葉皂苷鈉15毫克與地塞米松20毫克靜滴的作用對比，提出如下建議，為臨床合理用藥提供參考。
一、地塞米松禁忌
為對本品及腎上腺皮質激素類藥物有過敏史患者禁用，特殊情況下權衡利弊使用，注意病情惡化的可能：高血壓、血栓癥、胃與十二指腸潰瘍、精神病、電解質代謝異常、心肌梗塞、內(nèi)臟手術、青光眼等患者一般不宜使用。
二、注意事項
1.結核病、急性細菌性或病毒性感染患者應用時，必須給予適當?shù)目垢腥局委煛?.長期服藥后，停藥前應逐漸減量。3.糖尿病、骨質疏松癥、肝硬化、腎功能不良、甲狀腺功能低下患者慎用。
2.孕婦及哺乳期婦女用藥，妊娠期婦女使用可增加胎盤功能不全、新生兒體重減少或死胎的發(fā)生率，動物試驗有致畸作用，應權衡利弊使用。乳母接受大劑量給藥，則不應哺乳，防止藥物經(jīng)乳汁排泄，造成嬰兒生長抑制、腎上腺功能抑制等不良反應。
3.兒童用藥小兒如使用腎上腺皮質激素，須十分慎重，用激素可抑制患兒的生長和發(fā)育，如確有必要長期使用時，應使用短效或中效制劑，避免使用長效地塞米松制劑。并觀察顱內(nèi)壓的變化。
4.老年患者用藥易產(chǎn)生高血壓及糖尿病，老年患者尤其是更年期后的女性使用易加重骨質疏松。
三、藥理毒理
腎上腺皮質激素類藥。具有抗炎、抗過敏、抗風濕、免疫抑制作用，其作用機理為：1.抗炎作用：本品減輕和防止組織對炎癥的反應，從而減輕炎癥的表現(xiàn)。能夠抑制炎癥細胞，包括巨噬細胞和白細胞在炎癥部位的集聚，并抑制吞噬作用、溶酶體酶的釋放以及炎癥化學中介物的合成和釋放。2.免疫抑制作用：包括防止或抑制細胞介導的免疫反應，延遲性的過敏反應，減少T淋巴細胞、單核細胞、噬酸性細胞的數(shù)目，降低免疫球蛋白與細胞表面受體的結合能力，并抑制白介素的合成與釋放，從而降低T淋巴細胞向淋巴母細胞轉化，并減輕情原發(fā)免疫反應的擴展。本品還降低免疫復核物通過基底膜，并能減少補體成分及免疫球蛋白的濃度。
七葉皂苷鈉與地塞米松療效對比分析
1、β-七葉皂苷鈉與地塞米松治療糖尿病、結核病的臨床療效對比。經(jīng)研究，20mg地塞米松對于健康人來說，沒有什么大問題。但是，對于糖尿病病人來說可能誘發(fā)酮癥酸中毒導致死亡;對于結核病人來說可以加速結核菌的擴散;對于，骨質疏松癥的病人來說會加重病情等等，皂苷鈉則安全有效，具有滿意的臨床效果。
2.β-七葉皂苷鈉與地塞米松治療面神經(jīng)炎的臨床療效對比。對比研究地塞米松與β-七皂苷鈉治療面神經(jīng)炎的臨床療效。方法回顧性總結我院收治的面神經(jīng)炎患者62例治療資料。結果治療開始后2w時，觀察組31例患者顯效19例，有效11例，總有效率96.8%，明顯高于對照組療效結果(總有效率為83.9%)(< 0.05)，而兩組患者在治療開始后4w時的總有效率統(tǒng)計結果差異無統(tǒng)計學意義(100%VS96.8%)(< 0.05)。結論β-七《皂苷鈉治療面神經(jīng)炎安全有效，具有滿意的臨床效果。
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