HPLC測(cè)定覆盆子中金絲桃苷的含量分析

　　【摘要】 目的 建立覆盆子中金絲桃苷的含量測(cè)定方法。方法 采用HPLC法。SinoChrom ODS BP色譜柱(5µm，4.6×250mm)，流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85)，檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm。結(jié)果 金絲桃苷濃度線性范圍0.00506~0.1012mg/ mL，r =0.99994;樣品平均回收率為98.77%，RSD=1.57%(n=6)。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于該中藥的含量測(cè)定。

　　【關(guān)鍵詞】覆盆子 金絲桃苷 HPLC 藥學(xué)

　　【Abstract】 Objective To establish a method to determine Hyperin in Rubi Fructus.Methods A HPLC method was used. Chromatographic assay was performed on a SinoChrom ODS BP(5µm，4.6×250mm)column.The mobile phrase consisted of acetonitile-0.1% phosphoric(15:85),the detection wavelength was set at 360nm.Results The linear range of Hyperin was from 0.00506 to 0.1012mg/ mL and correlation coefficient was 0.99994.The average recovery of Hyperin was 98.77% and RSD was 1.57 %(n=6).Conclusion The method is simple ,accurate and reproducible for the determination of Hyperin in Rubi Fructus.

　　【Key words】 Rubi Fructus Hyperin HPLC

　　覆盆子為薔薇科植物華東覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果實(shí)，有益腎固精縮尿、養(yǎng)肝明目的功效，用于治療遺精滑精，遺尿尿頻，陽(yáng)痿早泄，目暗昏花。覆盆子果實(shí)中含有三萜類成分，覆盆子酸，鞣花酸，椴樹(shù)苷，胡蘿卜苷[1]，另有文獻(xiàn)報(bào)道，尚含黃酮化合物[2,3]。由于覆盆子基礎(chǔ)研究薄弱，2010年版《中國(guó)藥典(一部)》中僅有性狀鑒別和顯微鑒別[4]。目前已有椴樹(shù)苷的HPLC含測(cè)方法報(bào)道[5]，但尚無(wú)覆盆子中的金絲桃苷定量測(cè)定的文獻(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對(duì)其進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果表明，該方法快速簡(jiǎn)捷、重現(xiàn)性好，取得了滿意的結(jié)果。

　　1 實(shí)驗(yàn)部分

　　1.1 儀器與試藥

　　HP-Agilent1100型高效液相色譜儀，包括G1322A真空脫氣機(jī)，G1311A四元泵，G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器，G1365A多波長(zhǎng)檢測(cè)器，LGC-1025M柱溫箱，HP Rev.A.07.01色譜工作站;BP211D型1/10萬(wàn)電子分析天平(德國(guó)Sartorius公司);250超聲波清洗器(上海)。

　　金絲桃苷對(duì)照品(供含測(cè)用，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：111521-200303)。乙腈(色譜純，美國(guó)Tedia公司)，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

　　覆盆子Rubi Fructus，經(jīng)鑒定為薔薇科植物華東覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果實(shí)。

　　1.2 方法與結(jié)果

　　1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性考察[6]

　　色譜柱：SinoChrom ODS BP(5µm，4.6×250mm);流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85);流速：1mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm;柱溫：30℃;進(jìn)樣量：10µL;理論板數(shù)按金絲桃苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

　　1-金絲桃苷 1-Hyperin

　　圖1 對(duì)照品(A)和樣品(B)的色譜圖

　　Fig.1 Chromatograms of reference substance(A)and sample(B)

　　1.2.2 對(duì)照品溶液的制備

　　精密稱取金絲桃苷對(duì)照品10.12mg，置100mL量瓶中，加80%甲醇使溶解并定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密吸取2mL，置10mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

　　1.2.3 供試品溶液的制備[6]

　　取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250w，頻率40kHz)1小時(shí)，放冷，再稱定重量，加80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

　　1.2.4 線性關(guān)系考察

　　精密吸取“1.2.2” 項(xiàng)制備的對(duì)照品貯備液0.5，1，2，3，5，10mL，置10mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液10µL，按“1.2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)(X：mg/mL)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y ：mAU*s)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y = 208.3 1X - 0.0134，r = 0.999 94。結(jié)果表明，金絲桃苷在0.00506~0.1012mg/mL的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

　　1.2.5 精密度試驗(yàn)

　　精密吸取“1.2.2”項(xiàng)下制備的對(duì)照品溶液10µL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD=0.22%，表明本法精密度良好。

　　1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　取供試品溶液于制備后0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，金絲桃苷峰面積的RSD=0.59%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

　　1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

　　稱取同一批樣品6份，按“1.2.3”項(xiàng)下方法處理并測(cè)定含量，結(jié)果金絲桃苷RSD=1.17%，表明此方法重復(fù)性較好。

　　1.2.8 回收率試驗(yàn)

　　稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入一定量的對(duì)照品，按“1.2.3”項(xiàng)下方法處理并測(cè)定含量，分別計(jì)算樣品加樣回收率(結(jié)果見(jiàn)表1略)，平均回收率為98.77%，RSD=1.57%。

　　2 討論與總結(jié)

　　2.1 流動(dòng)相的選擇

　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液等多種不同比例的流動(dòng)相進(jìn)行比較試驗(yàn)，結(jié)果乙腈-0.1%磷酸溶液比例為15:85的系統(tǒng)分離效果較好，且峰形較好，故選擇本系統(tǒng)為流動(dòng)相。

　　2.2 含量測(cè)定的討論

　　本實(shí)驗(yàn)中1.2.9樣品的含量測(cè)定中第二批的含量和其它兩批含量差異較顯著，分析原因可能與覆盆子來(lái)源不同有關(guān)系，因此，仍需做大量實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。

　　2.3 含量與功效的關(guān)系

　　本實(shí)驗(yàn)確定了覆盆子中的黃酮類化合物為金絲桃苷，但是金絲桃苷含量的高低與覆盆子的功效之間的聯(lián)系仍不明確，還有待進(jìn)一步研究。

　　參考文獻(xiàn)

　　[1] 常新全，丁麗霞.中藥活性成分分析手冊(cè)[M].北京：學(xué)苑出版社，2002,1877

　　[2] 苗菊茹，謝一輝，劉紅寧.覆盆子的研究進(jìn)展[J].江西中醫(yī)藥，2004,1,1

　　[3] 劉勁松，王剛，王國(guó)凱.覆盆子化學(xué)成分研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2008,5, 15( 3): 197-199

　　[4] 中國(guó)藥典[S].一部，2010,359

　　[5] 虞金寶，呂武清，彭宏俊等.覆盆子中椴樹(shù)苷的含量測(cè)定研究[J].藥物研究，2008,17(23):8-9