【關(guān)鍵詞】

開展HIV抗體檢測是發(fā)現(xiàn)傳染源并進行有效管理的基礎(chǔ)，而艾滋病初篩實驗室是發(fā)現(xiàn)感染者的第一道關(guān)口，保證其檢測工作質(zhì)量是很重要的。為了更準(zhǔn)確、更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)爻鍪緳z測報告，本艾滋病初篩實驗室在參加省級機構(gòu)室間質(zhì)評的同時，還進行室內(nèi)質(zhì)量控制?，F(xiàn)將我室在實際工作中對艾滋病初篩實驗室的質(zhì)量管理進行了總結(jié)和探討，報告分析如下。

1 人員要求與培訓(xùn)

艾滋病初篩實驗室工作人員必須具有2年以上從事血清學(xué)檢測工作經(jīng)驗，上崗前必須接受省級以上HIV抗體篩查檢測技術(shù)培訓(xùn)并獲得合格證書。在工作中要定期或不定期接受復(fù)訓(xùn)。非衛(wèi)生專業(yè)技術(shù)人員不得從事HIV抗體檢測工作。

2 樣品的采集、處理和保存

HIV抗體篩查檢測最常用的樣品是血液，用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量靜脈血，室溫下自然放置1～2h，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min，吸出血清備用。采集樣品時應(yīng)避免溶血和微生物污染。渾濁或有沉淀的血清樣品應(yīng)先離心沉淀后取上清液檢測。

用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于-20℃以下，短期（1周）內(nèi)進行檢測的樣品存放于2～8℃。盡量避免血清樣品反復(fù)凍融產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

3 試劑準(zhǔn)備

篩查試劑必須經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、批檢合格在有效期內(nèi)的試劑，使用經(jīng)臨床質(zhì)量評估敏感性和特異高的試劑。必須是HIV-1/2混合型。

4 樣品檢測［1，2］

4.1 將試劑和樣品放置在室溫(18～23℃), 按HIV抗體篩查檢測的SOP做好試劑準(zhǔn)備。

4.2 備好試劑盒、待檢樣品和外部對照質(zhì)控血清后，按試劑盒說明書以及質(zhì)控和安全防護要求進行篩查檢測。注意防止樣品間交叉污染。

4.3 復(fù)檢試驗 對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實驗室進行確認(rèn)。

4.4 初篩試驗結(jié)果的報告 對呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實驗室出具HIV抗體陰性報告；對呈陽性反應(yīng)的樣品，須進行復(fù)檢，不能出陽性報告。

5 設(shè)備維護與校準(zhǔn)

設(shè)立常用儀器的維護及校準(zhǔn)制度，以保證正常運轉(zhuǎn)。

5.1 酶標(biāo)讀數(shù)儀、洗板機 每天：核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。每周：清潔儀器表面，保護光學(xué)零件不沾灰塵。每月：檢查洗滌時各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好，負(fù)壓是否符合規(guī)定要求。每年：檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對濾光片的精密度進行校準(zhǔn)并保留記錄。實驗過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應(yīng)隨時進行處理，可根據(jù)使用情況更換必要的部件。

5.2 移液器 1年至少應(yīng)該標(biāo)定1次，發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時進行校準(zhǔn)。標(biāo)定方法包括有色溶液光譜分析法、稱量校準(zhǔn)法、同位素計數(shù)法以及使用配套校準(zhǔn)盒等。校準(zhǔn)多道移液器時，必須保證每一個加樣頭都能夠連續(xù)、準(zhǔn)確地加樣。移液器的精密度應(yīng)在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。

5.3 冰箱和孵育箱 必須每天檢查和記錄低溫、超低溫冰箱及孵育箱的溫度，并做好記錄。

5.4 定期檢查其他儀器設(shè)備 精密儀器及出具實驗結(jié)果的儀器必須定期校準(zhǔn)，其他儀器定期檢查并做好記錄。每次操作時必須加入相應(yīng)的外部對照質(zhì)控血清，并把該結(jié)果及時報告給實驗室主任或?qū)嶒炇屹|(zhì)量控制人員。

6 實驗室內(nèi)質(zhì)量控制

6.1 一般使用內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清來進行質(zhì)量控制。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實驗室設(shè)置的一個弱陽性對照血清，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。

6.2 每一次檢測必須使用外部對照質(zhì)控血清，繪制質(zhì)量控制圖。每天檢測結(jié)束后，檢測者應(yīng)把當(dāng)天外部對照血清測定結(jié)果畫在圖上，確定在允許范圍內(nèi)，方可發(fā)出標(biāo)本檢測報告，這樣做可使檢測者及時分析質(zhì)量控制圖中出現(xiàn)的各種問題，采取相應(yīng)措施。

6.3 在ELISA法檢測HIV試驗中，當(dāng)外部對照血清的測定結(jié)果波動在x+2s范圍內(nèi)，表明工作正常，結(jié)果可靠；若超過x+2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，及時分析原始數(shù)據(jù)，對具體檢驗過程進行回顧性分析，查找原因后給予糾正并重復(fù)測試；若超過x+3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。

6.4 引起室內(nèi)質(zhì)控失控的原因很多。如：換用新批號診斷試劑盒或標(biāo)準(zhǔn)血清、儀器設(shè)備未經(jīng)檢定、校準(zhǔn)或測試、溫育時間和溫度不準(zhǔn)確、新的檢驗人員、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清反復(fù)凍融等，此時要及時查找原因予以糾正。

6.5 月底計算當(dāng)月測定結(jié)果的x、s和CV，并與其他月份同一批號質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清所得x、s和CV相比較，通過圖形資料對比進行誤差分析，從而發(fā)現(xiàn)常規(guī)檢測的精密性和準(zhǔn)確性是否發(fā)生了變化。

6.6 所用的外部對照質(zhì)控血清為低溫冷凍保存的液體，使用時要融化徹底并充分混勻，達(dá)到室溫方可使用。室內(nèi)質(zhì)量控制是通過對外部對照質(zhì)控血清的檢測和分析，推斷和控制常規(guī)標(biāo)本的檢測質(zhì)量，因此，外部對照質(zhì)控血清與檢測標(biāo)本必須同等對待。

6.7 通常把臨界值上下10％的范圍定為檢測結(jié)果灰區(qū)。對于檢測過程中出現(xiàn)的灰區(qū)標(biāo)本均應(yīng)進行重復(fù)試測，以減少假陽性和假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，并對實驗結(jié)果和過程進行記錄并存檔保存。

【參考文獻】
1 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范.中國疾病預(yù)防控制中心，2004，12.
2 梅玲.ELISA檢測HIV的實驗室內(nèi)質(zhì)量控制.中華醫(yī)學(xué)實踐雜志,2006,5(6):663-664.