如何診斷水貂的偽狂犬病

　　水貂偽狂犬病叫奧者氏奇病。本病的病原為皰疹病毒科、皰疹病毒屬中的成員，其臨床的主要特征為發(fā)熱、奇氧及腦脊髓炎。接下來學(xué)習(xí)啦小編就來為大家介紹一下水貂偽狂犬病的診斷方法。

　　據(jù)報(bào)道，1813年在美國首次發(fā)現(xiàn)本病;1902年匈牙利學(xué)者奧者氏奇作了首次報(bào)道，稱為阿氏病;1931年Shope證明此病與阿氏病為同一傳染病;1970年希臘某水貂場因本病死亡393只，死亡率為56.1%。自此以后，世界各地不斷發(fā)生，我國貂場也有本病存在。

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　　本病的潛伏期為數(shù)小時到3天。病貂臨床表現(xiàn)為食欲突然減少或不食，體溫升高40.5~41.5℃，表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，如強(qiáng)烈興奮、沖撞籠壁、轉(zhuǎn)圈運(yùn)動，發(fā)出尖聲嘶叫，交替出現(xiàn)精神沉郁，下頜麻痹，舌伸出口外有傷，步態(tài)不穩(wěn)，出現(xiàn)嘔吐和腹瀉，從口中流出血樣液體。病的后期臥地不起，痙攣，昏迷，眼裂縮小或斜向，出現(xiàn)癥狀后1~24小時死亡。

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　　本病除感染貂外，也感染豬、牛、羊、犬、貓、北極熊、銀狐、藍(lán)狐、貉、獾等。哺乳動物和禽類及蛙人工感染也可發(fā)病。本病的主要傳染源為發(fā)病動物，病豬、帶毒豬及帶毒鼠在傳播該病中起重要作用。病豬通過呼吸道分泌物、乳汁、尿液和生殖道分泌物排出病毒，污染飼料和飲水而傳播，也可通過直接接觸而傳染。如水貂采食了病豬和帶毒豬，病鼠和帶毒鼠的肉而感染發(fā)病，此病無明顯的季節(jié)性，常因飼料中混有病死動物的肉和內(nèi)臟而引起暴發(fā)流行。

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　　剖檢病死貂可見全身充血和出血，胃內(nèi)無異常內(nèi)容物，但其黏膜高度充血和出血，頭及肺水腫，扁桃體腫大。組織學(xué)變化病毒主要存在唾液腺、結(jié)膜、胸髓、心、肺也可能見到。無特征性組織學(xué)變化。

　　采取病貂的腦、扁桃體等，制備懸液，離心，取上清液，(www.nczfj.com)備用。①細(xì)胞培養(yǎng)。采取病料如病貂的腦、扁桃體等制成懸液，離心，取上清液接種于Vero細(xì)胞或兔原代腎細(xì)胞，在37℃ 1小時后，以維持液加足液量，繼續(xù)培養(yǎng)，18~24小時后出現(xiàn)病變，如病毒含量低可培養(yǎng)96小時出現(xiàn)病變。將細(xì)胞作蘇木紫-伊紅染色，鏡檢，可以看到嗜酸性核內(nèi)包涵體。②動物接種試驗(yàn)。取病死貂的腦及扁桃體，研碎后用Hanks液或磷酸鹽緩沖液(PBS)溶液制成10%懸液，離心10分鐘，取上清液作為接種材料。人工感染家兔，取上清液1~2毫升，腹側(cè)皮下接種，36~48小時，兔先舔舐接種點(diǎn)，然后用力嘶咬，直到掉毛、破皮、出血，4~6小時后衰竭、倒地、痙攣，呼吸困難，然后死亡。③病毒鑒定。用吸管吸培養(yǎng)物放于銅網(wǎng)上，然后加一滴負(fù)染液，再用吸紙接觸銅網(wǎng)邊緣，將多余液吸去，在室溫中干后即可在電鏡下檢查?？梢娫摬《?，其直徑為150~180納米，有囊膜。本病毒抵抗力較強(qiáng)，8℃條件下存活46天，24℃存活30天。加熱60℃，維持30分鐘，70℃維持20~30分鐘，l00℃很快殺死。

　　診斷水貂的偽狂犬病：血清學(xué)診斷

　　微量血清中和試驗(yàn)(固定病毒稀釋血清法)用0.025毫升的稀釋棒對稀釋液將各種血清連續(xù)作2倍稀釋，每孔滴下0.025毫升稀釋血清。接著每孔加入0.025毫升分離的病毒原液，然后將微量滴定板在室溫下放置30分鐘，使血清中的抗體與病毒相互作用，每孔再加入0.025毫升Vero細(xì)胞懸液(或兔腎原代細(xì)胞懸液)，加完血清和病毒孔后，多加幾個孔作細(xì)胞對照(由0.025毫升稀釋液和0.025毫升細(xì)胞懸液組成)。最后每孔加入0.05毫升礦物油封孔。將平板加蓋密封，在35℃溫箱中培養(yǎng)。經(jīng)過48小時培養(yǎng)后進(jìn)行觀察。陽性血清和待檢病毒孔因病毒已被中和，各孔長出細(xì)胞單層，可判為陽性;如病毒未被中和，已知陽性血清和待檢病毒孔細(xì)胞退化，產(chǎn)生病變則判為陰性。中和試驗(yàn)的計(jì)算公式(中和指數(shù)=試驗(yàn)組LD50÷對照組LD50)計(jì)算出血清中和價。

　　免疫熒光試驗(yàn)。采取病貂的腦、扁桃體等病料，切成10毫米×5毫米×3毫米小塊，浸于液氮中，取出后立即用冷凍切片機(jī)切片，將薄片貼于玻片上，在室溫下吹干，用丙酮固定后，用PBS洗3次，每次3分鐘。在玻片上的標(biāo)本上直接滴加用異硫氰熒光素標(biāo)記的熒光抗體進(jìn)行染色，使標(biāo)記的抗體與相應(yīng)的抗原結(jié)合，用PBS洗滌3次，用吸紙吸干，然后用磷酸甘油滴于玻片上，蓋上蓋玻片，封片，鏡檢。如在陽性標(biāo)本的胞漿內(nèi)出現(xiàn)黃綠色熒光顆粒，陰性標(biāo)本不出現(xiàn)熒光的條件下，被檢樣品在熒光顯微鏡下見到特異免疫熒光，可判為陽性;不出現(xiàn)特異熒光為陰性。